流式細胞儀-CyFlow Space
德國Partec是全球三大流式細胞儀生產(chǎn)廠家之一，其產(chǎn)品遍布全球180多個國家和地區(qū)，是卓越性能和優(yōu)良品質(zhì)的代名詞。公司成立于1967年，Partec公司早在1968年生產(chǎn)出第一臺商用流式細胞儀，是流式細胞儀的制造先驅(qū)。2013年Sysmex公司收購Partec公司后，成立Sysmex-Partec公司。Sysmex-Partec公司研制了新一代智能CyFlow®系列流式細胞儀和CyFlow®分選系統(tǒng)。具備經(jīng)典、穩(wěn)定的光學、液流系統(tǒng)，結合目前先進的計算機和數(shù)字電子技術，實現(xiàn)了流式細胞儀智能化、操作便捷化的革命。
一、靈活搭配激光，最高五激光十三色配置
CyFlow® Space設計緊湊，其所有的模塊和組件僅容納在長560×寬650×高300mm的狹小空間內(nèi)，相對于其他可用FCM系統(tǒng)，CyFlow® Space不需要連接任何外部設備。組件模塊化設計，可根據(jù)用戶需求進行光路調(diào)整，包括激光器更換、熒光通道更換等，易于維護。可選配CyFlow® Robby自動進樣系統(tǒng)，兼容96孔板、384孔板，可在15min完成96孔板分析。CyFlow® Space最高配置5個光源，包括4個可選激光器和高能365nm紫外光光源，配置13個熒光通道，可檢測16個光學參數(shù)（13個熒光通道+2×FSC+SSC）。
CyFlow® Space——可選擇的激光光源
二、最低檢測50nm顆粒
大部分常規(guī)流式細胞儀的分辨率都在200-500nm之間，無法分析納米級生物顆粒，例如細菌、病毒、亞細胞器和細胞外囊泡（EV）等顆粒。在檢測小顆粒時，側向角散射光分辨率優(yōu)于前向角散射光，首要原因在于大部分流式細胞儀的前向角檢測器使用低靈敏度的二極管，側向角檢測器和熒光信號檢測器都使用了高靈敏度的光電倍增管（PMT）或雪崩式光電二極管（APD），如果前向角也使用高靈敏度的PMT或APD呢？在檢測納米顆粒時，SSC的效果還是要比FSC好，原因在于如果檢測顆粒直徑遠大于入射光波長，即常規(guī)檢測細胞的情形，散射光符合米氏散射規(guī)律（Mie scattering theory），散射光的信號強度和測量角度密切相關，前向角的檢測效率優(yōu)于側向角，但如果在檢測納米顆粒時，直徑遠小于入射光波長，符合瑞利散射規(guī)律，檢測角度并不是影響散射光效率的因素，側向角的背景信號會遠低于前向角，所以SSC在檢測納米顆粒時分辨率會比FSC更有優(yōu)勢。
CyFlow® Space采用經(jīng)典穩(wěn)定的PMT光電倍增管檢測器，前向角FSC也采用PMT而非低靈敏度的二極管，保證了前向角的分辨率，可以最低檢測50nm顆粒，CyFlow® Space在納米級顆粒分析提供足夠的優(yōu)勢。
使用CyFlow® Cube8可檢測100nm顆粒
使用CyFlow® Space可檢測45nm顆粒
三、TVAC定體積絕對細胞計數(shù)功能
CyFlow® Space采用定體積細胞絕對計數(shù)方法（TVAC）對所有顆粒或細胞的濃度進行測定。這種先進的專利技術完全基于絕對計數(shù)來實現(xiàn)，即：顆粒濃度（C）是給定體積（V）內(nèi)的細胞數(shù)量（N），C= N/V。給定體積（V）是在已知直徑的的樣品管內(nèi)兩個電極之間的距離或者控制樣品速度的體積進行測量。
TVAC的特點：
1、絕對計數(shù)變異系數(shù)CV≤2%；
2、無需校正微球，節(jié)約成本；
3、無校正微球所引起的誤差，提高精度；
4、節(jié)約成本，簡化準備步驟。
四、高精度石英流動室
Partec擁有超過40年的流動室設計經(jīng)驗與技術，其生產(chǎn)的高機械精密度石英流動室尺寸為250um×350um，孔徑大不易堵塞，散射粒度范圍跨度涵蓋50nm至200μm。其核心技術是顆粒在高速流經(jīng)流動室時，通過高壓鞘液的包裹，準確、穩(wěn)定、連續(xù)地通過各個激光的光斑中心，被激發(fā)的熒光信號通過光膠耦合下的大孔徑物鏡被最大程度地接收。高精度石英流動室的專利技術可保證所有參數(shù)的精確度達到很高，即變異系數(shù)CV≤2%，樣本采用計算機控制推進器技術，其單一方向通過流動室，有效避免了交叉污染。
五、注射泵驅(qū)動系統(tǒng)
CyFlow® Space采用注射泵驅(qū)動進樣，不存在擠壓管路造成管路變形的情況，耗材不易損壞，壽命長達十年左右。所以由注射泵系統(tǒng)控制的絕對計數(shù)方式精確度很高，可長期保持液路穩(wěn)定。進樣速度0-1200ul/min連續(xù)精確可調(diào)，調(diào)節(jié)精度0.1μL/s。液路簡單，部分可兼容不同上樣管。
六、細胞分選系統(tǒng)
CyFlow®分選系統(tǒng)是Sysmex-Partec在流式細胞儀方面近50年的研究結晶。為了克服在常見分選過程中遇到的問題，諸如：分選成本過高、操作復雜、樣品液滴容易暴露于生物危害較高的氣溶膠中、分選樣本易受污染、機械壓力等，Sysmex-Partec公司研發(fā)出了無菌封閉式的CyFlow®分選系統(tǒng)。CyFlow®分選機的模塊組成包括一個用于壓電激活的金剛石壓電元件和電子裝置。壓晶體管可以迅速準確地使分選好的細胞偏轉到流動單元的第二通道。CyFlow®分選機是Sysmex-Partec CyFlow® Space的可選設備，并作為一個優(yōu)化模塊用于簡化和精確的細胞和顆粒分選操作。
在壓電激活過程中（圖1和2所示），將產(chǎn)生一個輕微的壓力波（圖3所示），因此，一小部分鞘液攜帶目的細胞或顆粒發(fā)生偏轉（圖4所示）。只要有細胞需要進行分選，分選過程中的壓電激活將會不斷地重復。整個分選過程非常平穩(wěn)，而且不存在傳統(tǒng)滴液分選的機械壓力等問題。因此，即使是易碎的細胞或大顆粒，在被CyFlow®分選機分選時不會在偏轉過程中產(chǎn)生變形和其它外力作用。另外，CyFlow®分選機的一個特殊功能是可以在同個區(qū)域內(nèi)對所有細胞進行正確分選。此高效率得益于數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)幾乎無空載時間。整個儀器硬件和軟件都是實時運行不被打斷的，所以不會丟失任何數(shù)據(jù)，而這種情況則經(jīng)常發(fā)生在其他現(xiàn)有的分選儀器上。因此 CyFlow®分選機不會出現(xiàn)細胞分選的錯誤，保證分選達到最高純度。
Sysmex-Partec CyFlow®分選系統(tǒng)極其穩(wěn)定，又因為整個系統(tǒng)是封閉的，非彈性的，并且沒有空氣，因此不會產(chǎn)生任何干擾顆粒分析的振動，而在滴液分選儀器上則會經(jīng)常發(fā)生這種問題。另外，基于CCD攝像機可以很容易地對分選延遲時間進行調(diào)節(jié)，所以微觀檢查是沒有必要的。同時，Sysmex-Partec分選機在低壓力的毛細管系統(tǒng)中運作，保證細胞形態(tài)和細胞活力（如像植物原生質(zhì)體一樣易碎的顆粒）將不會在分選過程中遭到損壞，從而實現(xiàn)了長時間的分選運行（可達上百毫升的樣本體積）。這款分選裝置可以安全的避免在常規(guī)操作條件下可以避免任何的環(huán)境污染。
在對測量和壓電激活之間的延遲時間控制方面，CyFlow®分選機可以對其進行極為精確和穩(wěn)定的系統(tǒng)控制。CyFlow® Space的另一個特點是其內(nèi)置了CCD攝像機裝置，它允許實驗者直接在儀器的屏幕上對整個分析過程進行檢查，即使在分選過程中也可以進行這樣的操作。
CyFlow®分選系統(tǒng)的特點：
-
操作簡便，兩步操作，就像按快門一樣輕松；
-
高生物安全性，無菌、全封閉設計；
-
采用不加電、不加壓的專利鉆石壓電晶體分選技術，保證分選細胞活力；
-
低成本，無需等待液流穩(wěn)定，無需計算液滴延遲。
七、FLOMAX®軟件功能強大且直觀
Windows? FloMax?軟件可以完成儀器控制、數(shù)據(jù)分析的各種功能，這些功能包括數(shù)據(jù)的實時采集、實時或離線數(shù)據(jù)分析、實時或離線的熒光補償?shù)裙δ?。該軟件可自由選擇、組合不同的參數(shù)設置界面和數(shù)據(jù)處理界面，便于不同應用程序之間完成切換。FloMax?被用于免疫學、微生物學、細胞周期分析、DNA 定量、倍性分析等所有應用領域。數(shù)據(jù)以流式細胞儀標準文件格式存儲，方便與其他分析軟件進行數(shù)據(jù)處理。FloMax?一個獨特的功能是，在進行分析的同時，對熒光的光譜重疊進行數(shù)字形式的在線/離線顏色串擾補償。N色軟件補償算法允許在任何參數(shù)之間進行串擾校正，而不需要重新跑樣。
FloMax®軟件系統(tǒng)完全支持CyFlow® Space的定體積絕對計數(shù)功能，即使在數(shù)據(jù)獲取之后，也能顯示任何細胞亞群的顆粒濃度。
FloMax?軟件規(guī)格
_ 基于 WindowsTM 的 FloMax®軟件，適用于常規(guī)工作和研究應用
_ 可編輯 FloMax®用戶環(huán)境
_ 原始數(shù)據(jù)的存儲和評估采用流式細胞儀標準文件格式（FCS 2.0, 3.0）
_ 8-16 個光學參數(shù)，可進行實時數(shù)據(jù)采集、分析和顯示
_ 64 個計算參數(shù)和時間參數(shù)
_ 一個參數(shù)的柱狀圖和二個參數(shù)的散點圖
_ 64-4096 的通道分辨率用于 1P 柱狀圖
_ 64/64-4096/4096 通道用于 2P 點圖
_ 線性 | 三個 log | 四個 log（可選）
_ 任意參數(shù)的單觸發(fā)或觸發(fā)所有
八、FCS Express數(shù)據(jù)分析軟件
FCS Express軟件專注于將流式細胞儀數(shù)據(jù)轉化為結果。FCS Express可為您提供快速數(shù)據(jù)分析，創(chuàng)建可發(fā)布出版物的圖表，提供高級篩選工具等功能。通過將數(shù)據(jù)直接導出為PowerPoint，PDF，Excel，Word和高分辨率圖像格式，可以更快地獲得結果。
FCS Express軟件特點：
-
集成電子表格；
-
出版期刊專用圖形；
-
FDA列出的第一個第三方流式細胞術數(shù)據(jù)分析軟件；
-
光譜分析；
-
數(shù)據(jù)分析符合FDA的《電子記錄和電子簽名規(guī)則》（CFR Part 11 Compliance）；
-
tSNE / SPADE / k-means等數(shù)據(jù)轉移；
-
輕松創(chuàng)建和應用補償；
-
批量處理數(shù)據(jù)；
-
門移動或數(shù)據(jù)更改時，統(tǒng)計值將實時更新；
-
熱圖顯示流式細胞圖像統(tǒng)計。
特點
概述：
●選用國際大廠的激光器和濾光鏡，高質(zhì)量的組件是性能穩(wěn)定的保障；
●組件模塊化，可根據(jù)用戶需求進行光路調(diào)整，包括激光器更換、熒光通道更換，方便維護和升級；
●靈活的模塊化設計，可定制各種不同研究、應用用途儀器可面向不同應用定制不同配置；
●德國制造工藝，性能一流，保證數(shù)據(jù)的精確性；
●超過40年的流動室研發(fā)經(jīng)驗，經(jīng)典和創(chuàng)新的完美結合；
●激光搭配靈活，最高五激光十三色，高性能、一體化設計為您的細胞分析提供解決方案；
●可放入生物安全柜中；
●出色的流體動力聚焦，使所有通道熒光變異系數(shù)CV≤2 %；
●熒光靈敏度：≤100 MESF(FITC) ；≤50 MESF(PE)；
●閾值可多通道調(diào)節(jié)；
●顆粒檢測范圍：50nm - 100μm；
●內(nèi)置CCD攝像機裝置，用于流動室檢測區(qū)液流監(jiān)控。
光路系統(tǒng)
●最高配備5個光源：可配備用于DNA高精度檢測的高能365nm紫外光光源；
●無光纖引導，激光空氣傳輸，避免光纖帶來的功率降低和使用成本增加；
●激光器可單獨開關，延長激光器壽命；
●采用光電倍增管（PMT）檢測器，極低的信號丟失率，可檢測低至50nm的顆粒；
●真正的插拔式模塊化光路設計，便于維護、保養(yǎng)和升級；
●16個光學參數(shù)，13個熒光通道+2×FSC+SSC，（均采用光電倍增管技術，目前主流儀器都采用此類型檢測器，確保數(shù)據(jù)完整記錄）；
●標準濾光片組；
●光膠耦合成像系統(tǒng)，用于檢測微量的細胞因子（選配）。
液路系統(tǒng)
●TVAC細胞絕對計數(shù)，節(jié)約成本和時間；
●250um×350um專利流動室，孔徑大不易堵塞，變異系數(shù)CV≤2%；DNA檢測CV≤1％；
●進樣速度：0.1-20ul/s可調(diào)；
●真空泵動力設計，800mbar防止管路堵塞；
●檢測速度：25,000 cells/s；
●可選配自動上樣器，兼容96孔板，384孔板，可在15min完成96孔板分析。
分選系統(tǒng)
●操作簡便，兩步操作，選擇待分選細胞群，點擊分選按鈕；
●高生物安全性，無菌、全封閉設計；
●采用專利鉆石壓電晶體分選技術，保證分選細胞活力；
●低成本，無需等待液流穩(wěn)定，無需計算液滴延遲。
應用
細胞凋亡的檢測與分析
DNA含量檢測和細胞周期檢測
倍性和基因組大小檢測
細胞的增殖檢測
細胞毒性的檢測
可溶性蛋白質(zhì)分子的檢測
報告基因的檢測
細胞因子檢測
免疫分型檢測
細胞內(nèi)活性氧水平的檢測
細胞膜電位檢測
細胞內(nèi)鈣離子濃度檢測
微生物檢測
CyFlow Space
【1】Seeger, P.，Bosisio, D.，Parolini, S.，Badolato, R.，Gismondi, A.，Santoni, A.Sozzani, S..Activin A as a mediator of NK-dendritic cell functional interactions.The Journal of immunology.192(3),1241-124(2014).
【2】Dabritz, J.，Weinhage, T.，Varga, G.，Wirth, T.，Walscheid, K.，Brockhausen, A.，Schwarzmaier, D.，Bruckner, M.，Ross, M.，Bettenworth, D.，Roth, J.， Ehrchen, J. M.， Foell, D..Reprogramming of Monocytes by GM-CSF Contributes to Regulatory Immune Functions during Intestinal Inflammation. The Journal of immunology.194(5),2424-2438(2015).
【3】Froschauer Alexander，Kube Lisa，Kegler Alexandra，Rieger Christiane，Gutzeit Herwig O.，Winkler Christoph.Tunable Protein Stabilization In Vivo Mediated by Shield-1 in Transgenic Medaka.PloS one. 10(7),e0131252.
【4】Michael,Berney ; Frederik,Hammes ; Franziska,Bosshard ; Hans-Ulrich,Weilenmann ; Thomas,Egli.
Assessment and interpretation of bacterial viability by using the LIVE/DEAD BacLight Kit in combination with flow cytometry.Applied and environmental microbiology.73(10),3283-3290(2007).
【5】Yingying Wang 1, Frederik Hammes, Nico Boon, Mohamed Chami, Thomas Egli.Isolation and characterization of low nucleic acid (LNA)-content bacteria.ISME Journal. (2009) Vol. 3: 889-902.
【6】Moghadam，Mohamad，Kafiabadi，Sedigheh，Amini，Ranjbaran，Reza，Karimi，Mehran，Haghpanah，Sezaneh，Tahmasbi，Leila，Nikougoftar，Mahin.Evaluation of plasma platelet microparticles in thrombotic thrombocytopenic purpura.Annals of clinical&laboratory sciencs.47(1):62-67(2017).
